Muchos fármacos que alteran las interacciones colinérgicas han sido utilizados para la caracterización de cepas mutantes del gusano C.elegans, así como también para el estudio de las vías de señalización de comportamientos específicos. . Ensayos realizados con las drogas aldicarb y levamisol han permitido grandes aportes para la comprensión de la neurobiología de C. elegans. Las drogas levamisol y aldicarb son de gran utilidad para distinguir defectos a nivel pre y post-sinápticos. En presencia de ambas drogas los nematodos se paralizan de manera progresiva. El levamisol actúa como agonista de la acetilcolina, produciendo hipercontracción y parálisis en la cepa salvaje. Por otro lado, el aldicarb inhibe la enzima acetilcolinesterasa, la cual hidroliza a la acetilcolina durante la sinapsis colinérgica. La acumulación de acetilcolina en el espacio presináptico produce sobre-estimulación de los músculos hacía la contracción produciendo finalmente la parálisis.
El sistema WMicrotracker permite cuantificar fácilmente el efecto y la cinética de los moduladores de canales de acetilcolina, así como otros canales neuronales implicados en el comportamiento. A continuación presentamos un ejemplo de su aplicación.
Respuesta a la dosis de Aldicarb y Levamisol
En estos experimentos se puede observar la cinética y el efecto dosis-respuesta de dos moduladores de canales de acetilcolina: Aldicarb y Levamisol. Observar que a la hora ya se registra un efecto cuantitativo de efecto dosis-respuesta.
Metodología:
(1) Obtener poblaciones sincronizadas de gusanos en placas NGM. (2) Lavar los gusanos de las placas con solución tampón. (3) Contar el número de gusanos en 10ul, y ajustar el volumen para obtener una concentración de 5 gusanos / 10ul. (4) Transferir 90 μl de la solución de gusanos a una microplaca de 96 pocillos usando una pipeta multicanal (opcional/recomendado:) Dejar reposar la placa durante 1h y medir la actividad basal con WMicrotracker. (5) Añadir 10 μl de Aldicarb o Levamisol a cada pocillo para alcanzar la concentración final deseada. (6) Registrar la microplaca con WMicrotracker.