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Dibucaine in ionic-gradient liposomes

El selenio es un oligoelemento para la mayoría de los organismos; Su deficiencia y exceso son perjudiciales. Los efectos beneficiosos del selenio se deben principalmente al rol del aminoácido 21 genéticamente codificado, la selenocisteína (Sec). En Caenorhabditis elegans, Sec se incorpora genéticamente en una sola selenoproteína. Similar a los mamíferos, un exceso de 20 veces el requerimiento óptimo de selenio es dañino. Para estudiar la respuesta del organismo al selenio, se realizó una búsqueda de mutantes de C. elegans resistentes al selenio. Se aislaron mutantes sin sentido (non-sense) y de sentido erróneo (missense) egl-9 / EGLN que confirieron resistencia al selenio. En contraste, el mutante nulo hif-1 / HIF resulto sensible al selenio, estableciendo un rol para este factor de transcripción en la respuesta al selenio.

Materiales y Métodos

Los testeos de toxicidad en medio líquido se realizaron con el dispositivo WMicrotracker. Los bloques de registro analizados son de 15 min. Los experimentos se realizaron en placas de 96 pocillos, utilizando 80 animales L4 sincronizados por pocillo en un volumen final de 100 μL. Se evaluaron cuatro pocillos por condición por cepa en cada réplica. Los experimentos se repitieron al menos tres veces. En todos los casos, los datos se normalizaron con el registro basal antes de agregar el compuesto de interés o su vehículo. A esta actividad basal se le asignó un valor arbitrario de uno. Todos los ensayos incluyen la cepa salvaje y el vehículo para cada cepa como control.

Resultados

La actividad locomotora de C. elegans se ve afectada por la presencia de selenio de modo dosis-dependiente. Mutantes fenotípicos resistentes al Selenio se utilizaron para complementar el registro de actividad locomotora. La Figura 2A muestra una curva típica de toxicidad dependientes del tiempo y de la dosis, empleando las cepas N2 y egl-9 (zf150). Dado que EGL-9 regula negativamente HIF-1, también se examinaron mutantes de pérdida de función hif-1 (ia04) para determinar su respuesta al selenio. Esta cepa fue más sensible que la cepa salvaje N2 (Figuras 3B – D). En presencia de selenio, los animales mutantes hif-1 (ia04) disminuyeron significativamente la actividad locomotora en comparación con la cepa salvaje (Figuras 3B, C).

FIGURE 2 | egl-9 mutant strains are resistant to toxic selenite concentration. Locomotor activity refers to the motility of a population of worms, relative to the basal activity measured before the addition of the compound of interest, as detailed in methods. (A) Locomotor activity of egl-9(zf150) mutant worms and wild-type (WT) in 0, 10, and 20 mM of sodium selenite (Na2SeO3) for 16 h. Points indicate the average of locomotor activities measured every 15 min. AU: arbitrary units.

FIGURE 3 | CYSL-1 functions as a selenium sensor upstream of EGL-9 leading to increased HIF-1 activity. Locomotor activity refers to the motility of a population of worms, relative to the basal activity measured before the addition of the compound of interest, as detailed in methods. Error bars (only + shown) indicate standard deviation. Different lowercase letters denote significant differences obtained by Tukey test. (B) Locomotor activity of hif-1(ia04) and WT animals in 0, 5, and 10 mM of Na2SeO3 for 16 h. Points indicate the average of locomotor activities measured every 15 min. AU: arbitrary units. 

Front Genet. 2020 Feb 25;11:63. doi: 10.3389/fgene.2020.00063.

Romanelli-Credrez L, Doitsidou M, Alkema MJ, Salinas G.