Existe una necesidad continua de desarrollar modelos animales simples para el estudio de las interacciones huésped-patógeno. También es necesario identificar y estudiar los mecanismos de virulencia. Varias características de C.elegans lo convierten en un organismo modelo ideal para estudiar la interacción huésped-patógeno a nivel genético y molecular. C.elegans presenta características conservadas de virulencia inducida por patógenos (p. Ej., Proteasa de Staphylococcus V8, exotoxina A de Pseudomonas) y mecanismos inmunitarios innatos del huésped (p. Ej., Péptidos antimicrobianos (AMP) y rutas de MAPK) con mamíferos, artrópodos y plantas (Kumar et al 2019).
Este nematodo puede sufrir daños letales causados por una amplia gama de patógenos humanos, como Gram-positivos (Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus y Streptococcus pneumoniae) y bacterias Gram-negativas (Salmonella enterica, Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia cepacia y Serratia marcescens) y diferentes hongos (Candida albicans y C. neoformans) (Kumar et al 2019).
Generalmente, los patógenos bacterianos infectan a los nematodos por colonización directa dentro del intestino o indirectamente por secreción de toxinas. Con WMicrotracker, es posible estudiar fácilmente la infección bacteriana en C.elegans (y otros organismos pequeños) para descubrir nuevos antibióticos, natural killers o genes que mejoran la resistencia inmunológica. A continuación presentamos un ejemplo de aplicación:
En este experimento se puede observar una cinética de largo plazo y el efecto dosis-respuesta del sobrenadante de Pseudomonas CHA0 en C.elegans. La muerte por parálisis es causada por la presencia del cianuro de hidrógeno producido por la bacteria.
PROTOCOLO:
- Obtener poblaciones sincronizadas de gusanos GLP-4 adultos crecidos en NGM + OP50 a 25 ° C.
- Retirar los gusanos de las placas con solución M9 y transferirlos a un tubo estéril de 15 ml.
- Dejar que los gusanos decanten. Retirar el sobrenadante teniendo cuidado de no alterar el sedimento.
- Realizar un lavado con 5 ml de solución M9. Agitar brevemente o invertir el tubo.
- Agregar 3 ml de medio nutritivo.
- Contar el número de gusanos en un volumen de 10 µl y ajustar el volumen para obtener una concentración de [5 gusanos / 10 µl].
- Transferir por pocillo 90 µl de la solución de nematodos a una microplaca de 96 pocillos utilizando una pipeta multicanal.
- Agregar 10 µl del sobrenadante de cultivo bacteriano a testear y agitar suavemente la microplaca con la mano.
- Registrar la actividad de la placa con gusanos usando WMicrotracker.
- Generar el informe de datos con el software WMicrotracker One y graficar con MSExcel.
Cell Mol Life Sci. 2020 Apr;77(7):1229-1249. doi: 10.1007/s00018-019-03319-7.
Kumar A, Baruah A, Tomioka M, Iino Y, Kalita MC, Khan M.